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檢測前 水樣預處理相關
1.含有余氯水樣在進行大腸菌群指標檢測前是否需要進行預處理？
答：需要。
余氯包括游離性余氯和化合性余氯。游離性余氯（HClO、ClO?、Cl?）與化合性余氯（NH?Cl、NHCl?）能快速破壞細菌的細胞壁、細胞膜，氧化細菌內部的酶和遺傳物質，導致細菌死亡。如果對含余氯水樣不進行預處理，水樣中的大腸菌群可能部分被殺滅、導致檢測結果偏低。
表1 余氯預處理相關標準
針對含余氯水樣，可選用泰林無菌取水袋或無菌取樣瓶，兩類產品均按照 GB/T 5750.2-2023《生活飲用水標準檢驗方法 第 2 部分：水樣的采集與保存》的相關要求添加硫代硫酸鈉，可有效去除水樣中的余氯。若使用泰林未添加硫代硫酸鈉的無菌取水袋、無菌取樣瓶，建議對含余氯水樣先行預處理。
2.重金屬離子含量高的水樣為什么要進行預處理？
重金屬離子會改變酶底物試劑體系的離子強度與pH值，直接抑制目標微生物體內酶的活性，導致其無法與酶底物充分反應。部分重金屬離子與顯色劑或反應產物結合，產生沉淀影響判讀，造成檢測結果偏低。
根據HJ 1001-2018《水質 總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法》與HJ 347.2-2018《水質 糞大腸菌群的測定 多管發酵法》規定：如果采集的是重金屬離子含量高的水樣，應在每100mL水樣中添加0.036g乙二胺四乙酸二鈉。
小貼士
環境水樣中北方地區干旱降雨少，且廣泛分布石灰巖、白云巖、富鈣黃土等，礦物質易被水溶解，導致水樣中重金屬離子含量偏高。南方地區濕潤多雨，且主要分布火成巖（花崗巖等）、變質巖等，礦物質不易溶解，水體重金屬離子含量偏低。
地下水因漫長滲透過程，能夠充分溶解地層（如石灰巖、石膏）中的金屬離子，地下水的重金屬含量普遍高于地表水。
泰林酶底物法大腸菌群檢測試劑復配多種成分，能夠緩沖重金屬離子的沖擊，各組分與重金屬離子不會發生理化反應。經質控菌株與水樣檢測驗證，使用泰林的耗材與酶底物法大腸菌群檢測試劑，不需對重金屬離子含量高的水樣額外進行預處理。
檢測中 實驗過程與培養相關
1.酶底物法大腸菌群檢測出現淺色孔的原因、處理方法與檢測結果判讀？
答：酶底物法大腸菌群檢測出現淺色孔的原因有：
1）水體中的部分大腸菌群自身生長慢、產酶少。
2）環境壓力造成部分大腸菌群菌體處于損傷狀態。
根據GB/T 5750.12-2023 《生活飲用水標準檢驗方法 第12部分：微生物指標》總大腸菌群檢測酶底物法規定：如果結果為可疑陽性，可延長培養時間到28h進行結果判讀。
培養時間小于 24h出現的陽性結果視作有效，培養時間高于28h的陰性結果也視為有效。
24-28h內出現的結果變化以 28h最終結果為有效結果，28h后出現的結果變化均視為無效。
2. 酶底物法大腸菌群檢測出現可疑陽性孔、為什么可以延長培養時間至28h觀察結果？
答：延長培養時間至28h，是對24h可疑陽性結果的補充確認。如果24h已出現明確陽性，則不需延長培養。只有存在難以辨認的可疑陽性結果，需延長培養時間至28h。
對大腸菌群：28h是一個經過驗證的、能充分促進絕大多數受到環境壓力而菌體損傷的大腸菌群恢復的窗口期。
對于非大腸菌群：28h是一個安全邊界，可以確保抑菌成分的有效性，最大限度地防止非大腸菌群的生長，從而保證方法的高特異性。
3. 為什么糞大腸菌群檢測時，定量盤中會出現漸變黃色？
答：因為培養箱加熱方式、定量盤擺放與堆疊方式造成定量盤受熱不均，影響糞大腸菌群的生長。
定量盤擺放與堆疊方式造成箱體內熱傳遞更慢，熱分布更不均勻。糞大腸菌群作為溫度敏感型細菌，在溫度低的一側生長產酶變色，在溫度高的一側（如超出了44.5 ± 0.5℃的上限），生長被抑制，出現如下圖所示的漸變色。
當定量盤出現漸變黃色，應立刻依據GB/T 10592-2023 《高低溫試驗箱技術條件》與GB/T 28851-2012 《生化培養箱技術條件》相關標準進行培養箱溫度驗證。根據驗證結果，采用JJF 1101-2019 《環境試驗設備溫度、濕度參數校準規范》與《培養箱使用說明書》進行溫度調節。保證培養溫度符合檢測條件。
建議糞大腸菌群檢測時，使用隔水式培養箱，定期進行溫度驗證，將定量盤置于培養箱中央，且定量盤堆疊不超過5個，每疊定量盤之間至少間隔5cm。
檢測后 廢棄物處理相關
1. 酶底物法微生物檢測培養后的定量盤如何處理？
答：培養后的定量盤經121℃、高壓蒸汽滅菌20min后，作為一般廢棄物處理。
1）培養后的定量盤置于專用的廢棄物容器內，集中存放在指定地點。
2）培養后的定量盤每20個放入雙層生物安全滅菌袋中，袋口打結。
3）放入滅菌鍋經121℃、高壓蒸汽滅菌20min處理后，作為一般廢棄物處理。
集中存放→雙層生物安全滅菌袋→121°C、高壓蒸汽滅菌20min
依據GB 19489-2008 《實驗室生物安全通用要求》；SN/T 4835-2017 《實驗室生物廢棄物管理要求》；HJ 1001-2018 《水質 總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法》相關規定。